Hur fungerar bakteriell endotoxintestning?

Bakteriell endotoxintestning involverar typiskt användningen av reagens som, vid blandning i en lösning med en möjlig förorening, orsakar en reaktion, vilket indikerar närvaron av ett endotoxin. Kromogen testning, gelproppstestet och turbidimetrisk testning är de metoder som forskare brukar använda för bakteriell endotoxintestning. Tekniker använder dessa utvärderingsmetoder på olika ämnen och föremål vid kontroll av endotoxinförorening. Vatten, råvarorna som används vid tillverkning av mediciner, utrustning och förpackningar måste alla övergå till endotoxinstandarder.

Bakterier, svampar och virus har alla skyddande yttre membran bestående av lipopolysackarider, även benämnda LPS. Lipiddelen av dessa kedjor innehåller endotoxiner. Dessa substanser håller sig vanligtvis inom membranet men frisätts under celldelning och under cellulär förstöring eller lysis. Hos människor orsakar dessa substanser feber, onormal koagulation, septisk chock och andra symtom, men i motsats till exotoxiner i cellen omvandlas endotoxiner inte till en toxoid. I allmänhet kontrollerar mikrobiologerna närvaron av endotoxiner associerade med olika gram-negativa bakterier, inklusive E. coli.

Gelproppstestet, eller Limulus ameboecyte lysat (LAL) -analysen innefattar att använda en membranförstörande kemikalie härledd från amoebocyterna hos hästskräpskrabben, även kallad Limulus polyphemus. Tekniker observerar en positiv indikation på endotoxiner om koagulering eller gelning uppstår när lysatet utsätts för föremålet eller ämnet i fråga. Mikrobiologer brukar använda denna metod för bakteriell endotoxintestning i samband med kromogen och turbidimetrisk testning för avgörande resultat.

Kromogen bakteriell endotoxintestning använder en speciellt behandlad LAL. När detta lysat kommer i kontakt med ett endotoxin, ger reaktionen en specifik färg. Den slutliga testprocessen innefattar att mäta lösningens grumlighet eller grumlighet. Tekniker exponerar den lösning som bildas i gelproppstestet till en spektrofotometer som avger en ljusstråle. Genom att mäta förlusten av ljusintensitet i strålen när den passerar genom lösningen kan mikrobiologerna bestämma huruvida ett endotoxin föreligger eller inte.

Lab associates utför i allmänhet dessa tre bakteriella endotoxintester två eller tre gånger för att säkerställa noggranna resultat. Geltestet används inte uteslutande eftersom dess lägsta detektionsgräns är 0,03 Ehrlich Units per milliliter (EU / ml). Kromogen och turbidimetrisk provning upptäcker endotoxiner i området 0,005 EU / ml. Säkerhetsparametrar varierar mycket beroende på ämnet som testas. Medan sterilt vatten som används för injektion eller bevattning kan innehålla högst 0,25 EU / ml, kan sterilt vatten för inandning innehålla upp till 0,5 EU / ml.